分子量较大的蛋白怎么做wb实验

发布网友发布时间：2022-04-20 19:03

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热心网友时间：2023-07-12 16:15

会。
大分子量蛋白WB一直被大家吐槽难做，各种没结果，今天特意总结了师兄的一些tips给大家，快干了这杯干货！
样品制备大分子量蛋白不好提取，因为许多大分子量蛋白是膜蛋白，膜蛋白属于非可溶性蛋白，且表达量通常较低，一般使用溶液法（RIPA等）裂解时，通常会丢失在不可溶组分中，所以要选择合适的方法来进行蛋白的提取或富集。提取总蛋白时建议适当延长孵育时间，有助于大分子量蛋白的充*解！分离胶的使用及浓度凝胶主要有Tris-Glycine, Bis-Tris and Tris-Acetate三种，Tris-Glycine凝胶的PH为8.6，Bis-Tris凝胶的PH为6.4，Tris-Acetate 凝胶的PH为7。推荐使用Tris-Acetate 凝胶跑大分子蛋白，会呈现更高的分辨率。凝胶浓度与孔径成反比，即凝胶浓度越小，孔越大，较大分子量的蛋白质更容易通过，所以建议使用6-8％浓度的分离胶，当然也可以使用梯度凝胶。

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